NLuc熒光素酶檢測試劑盒（Nano Luciferase Reporter Gene Assay Kit, 10T）是一種專門設(shè)計用于檢測NanoLuc®熒光素酶活性的高靈敏度實驗工具。NanoLuc®熒光素酶是一種小型、高效的熒光素酶，由Promega公司開發(fā)，其優(yōu)異的發(fā)光性能使其在基因表達(dá)分析、藥物篩選和生物發(fā)光成像等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。下面是對NLuc熒光素酶檢測試劑盒的詳細(xì)介紹。

1. 螢火蟲熒光素酶檢測試劑盒廠家：NanoLuc®熒光素酶的基本原理

NanoLuc®熒光素酶（簡稱NLuc）是一種體積小巧的發(fā)光酶，與傳統(tǒng)的螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶相比，它具有更高的亮度、更長的發(fā)光持續(xù)時間以及更的靈敏度。NLuc的分子量僅為19.1 kDa，使其在細(xì)胞和生物系統(tǒng)中表現(xiàn)出的穩(wěn)定性和兼容性。

NLuc熒光素酶的發(fā)光反應(yīng)依賴于其特定的底物Furimazine。通過酶促反應(yīng)，F(xiàn)urimazine被氧化，產(chǎn)生強烈的藍(lán)光發(fā)射（λmax約為460 nm）。由于NLuc的高量子效率，即使是極低水平的酶表達(dá)也能產(chǎn)生可檢測的光信號，這為檢測微量基因表達(dá)或低豐度蛋白質(zhì)提供了可能。

2. 螢火蟲熒光素酶檢測試劑盒廠家：試劑盒的組成

NLuc熒光素酶檢測試劑盒通常包括以下組件：

• NanoLuc®熒光素酶底物（Furimazine）：特異性高的發(fā)光底物，能夠與NLuc熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生高強度的光信號。

• 細(xì)胞裂解液：用于裂解細(xì)胞，釋放出其中的NanoLuc®熒光素酶，以便于后續(xù)的發(fā)光檢測。

• 反應(yīng)緩沖液：優(yōu)化的緩沖體系，確保在合適的pH和離子強度下進行高效的發(fā)光反應(yīng)。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：NanoLuc®熒光素酶的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便對實驗樣品中的酶活性進行定量分析。

• 用戶手冊：詳細(xì)的操作步驟和注意事項，指導(dǎo)實驗的順利進行。

3. 應(yīng)用領(lǐng)域

3.1 基因表達(dá)分析

NLuc熒光素酶檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析。通過將NanoLuc®熒光素酶基因（nluc基因）與目標(biāo)基因的啟動子或調(diào)控元件連接，研究人員可以通過檢測NLuc的發(fā)光強度來定量分析目標(biāo)基因的表達(dá)水平。這種方法特別適用于檢測微量基因表達(dá)，或在復(fù)雜的生物環(huán)境中研究基因調(diào)控機制。

由于NLuc熒光素酶的高靈敏度，研究人員能夠在極低的背景噪音下檢測到微弱的基因表達(dá)信號，從而在各種實驗條件下獲得精確的基因表達(dá)數(shù)據(jù)。

3.2 藥物篩選

NLuc熒光素酶檢測試劑盒在高通量藥物篩選（HTS）中表現(xiàn)出色。通過在細(xì)胞系中引入NanoLuc®熒光素酶報告基因，研究人員可以評估化合物對特定基因或信號通路的影響。由于NLuc的發(fā)光信號強度高、響應(yīng)快速，篩選過程中能夠快速識別出對目標(biāo)靶點有顯著作用的候選化合物。

這種方法特別適用于篩選調(diào)節(jié)特定基因表達(dá)或細(xì)胞功能的化合物，幫助加速新藥開發(fā)的進程。

3.3 生物發(fā)光成像

NanoLuc®熒光素酶的另一重要應(yīng)用是活體生物發(fā)光成像。其小巧的結(jié)構(gòu)和高發(fā)光效率使其非常適合在活體動物模型中進行生物發(fā)光成像。NLuc與Furimazine底物結(jié)合，在體內(nèi)可以產(chǎn)生明亮的發(fā)光信號，研究人員可以通過專用的成像設(shè)備實時監(jiān)測動物體內(nèi)的基因表達(dá)或細(xì)胞行為。

這種技術(shù)在腫瘤生長、細(xì)胞遷移、基因表達(dá)調(diào)控等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。由于NLuc發(fā)光的藍(lán)光具有較強的組織穿透能力，研究人員能夠獲得高分辨率的體內(nèi)成像數(shù)據(jù)。

4. 操作步驟

使用NLuc熒光素酶檢測試劑盒的典型操作步驟如下：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)與處理：將表達(dá)NanoLuc®熒光素酶的細(xì)胞接種于96孔板或其他培養(yǎng)容器中，并根據(jù)實驗設(shè)計進行處理（如藥物刺激、基因敲除或過表達(dá)）。

2. 細(xì)胞裂解：加入適量的細(xì)胞裂解液，裂解細(xì)胞以釋放NanoLuc®熒光素酶。

3. 底物反應(yīng)：將NanoLuc®熒光素酶底物（Furimazine）加入裂解液中，混勻后立即進行發(fā)光檢測。

4. 發(fā)光檢測：使用發(fā)光計（Luminometer）測量發(fā)光強度。光信號的強度與NanoLuc®熒光素酶的活性成正比，可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品中的酶活性進行定量。

5. 數(shù)據(jù)分析：根據(jù)實驗需求，對發(fā)光數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，得出基因表達(dá)水平或藥物效應(yīng)的結(jié)論。

5. 優(yōu)勢與局限性

NLuc熒光素酶檢測試劑盒具有許多的優(yōu)勢：

• 超高靈敏度：NanoLuc®熒光素酶比傳統(tǒng)的螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶具有更高的發(fā)光強度，使其能夠檢測到極低水平的基因表達(dá)或蛋白質(zhì)活性。

• 快速響應(yīng)：發(fā)光反應(yīng)幾乎是即時的，這使得NLuc適用于需要快速檢測的實驗。

• 低背景噪聲：由于NanoLuc®熒光素酶與其底物的高度特異性，非特異性背景信號極低，這提高了數(shù)據(jù)的可靠性和精確度。

• 穩(wěn)定性高：NanoLuc®熒光素酶在各種實驗條件下表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，減少了實驗中的變量影響。

然而，NLuc熒光素酶檢測試劑盒也存在一些局限性：

• 光譜特性：NLuc發(fā)射的藍(lán)光雖然亮度高，但在一些實驗條件下，較長波長的發(fā)光可能更適合深部組織成像或減少自體熒光干擾。

• 底物依賴性：NLuc發(fā)光系統(tǒng)依賴于專用的Furimazine底物，這可能限制其與其他發(fā)光系統(tǒng)的兼容性。

6. 實驗注意事項

• 底物處理：Furimazine底物具有一定的光敏性，因此在操作時應(yīng)避免長時間暴露在強光下，并在避光條件下儲存。

• 溫度控制：實驗過程中應(yīng)保持合適的溫度，通常在室溫下操作即可。溫度條件可能影響酶的活性和發(fā)光反應(yīng)。

• 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化：為了獲得可重復(fù)的結(jié)果，應(yīng)在每次實驗中使用標(biāo)準(zhǔn)品進行校準(zhǔn)，并考慮使用內(nèi)部對照進行數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。

7. 總結(jié)

NLuc熒光素酶檢測試劑盒（Nano Luciferase Reporter Gene Assay Kit, 10T）是一種高度靈敏、操作簡便的實驗工具，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、藥物篩選和生物發(fā)光成像等領(lǐng)域。其小巧的酶結(jié)構(gòu)、高效的發(fā)光性能以及低背景噪聲使其成為現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中的重要工具。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，NLuc熒光素酶系統(tǒng)將繼續(xù)在科學(xué)研究中發(fā)揮關(guān)鍵作用，推動基因調(diào)控、藥物發(fā)現(xiàn)和生物成像等領(lǐng)域的進步。